动物组织基因组提取试剂盒

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，从样品中分离纯化高质量基因组DNA，特殊包被的磁珠，在一定条件下对目的DNA具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的DNA，能够达到快速分离纯化DNA的目的。整个过程不涉及有毒试剂，安全、便捷、提取的DNA纯度高。使用本试剂盒纯化的基因组DNA均在1.7~2.0之间，可以应用到各类下游分子生物学实验。

适用范围

从动物组织中提取基因组DNA，适用于核酸自动化提取平台。

试剂盒包装及组成

注意事项

1、 磁珠使用前一定要充分混匀。

2、如果下游实验对RNA 污染比较敏感，可在裂解时加1μl RNaseA（10mg/ml）。

3、如果是干材料，适当延长裂解时间；种子用粉碎机打成粉末状使用，样品为种子时，裂解时间为30min。

4、如果同等取样量下欲得到更多DNA 可以增加洗脱次数（洗脱次数最好不要超过3 次），也可以适当延长裂解时间。

5、取材量参照下面表格

操作步骤

1、裂解

取新鲜动物组织10mg～50mg，与研钵中研磨。加入480μl 裂解液S1、120μl 裂解液S2、20μl 蛋白酶 K，研磨均匀，然后转移至1.5ml EP 管中，吹打或点阵混合均匀。然后把EP 管置于恒温水箱中65℃温育15～30min。

2.结合

将EP管从温育设备中取出，12000rpm 离心10min。取500 μl 上清，加入振荡混匀的磁珠30μl、500μl 结合液(也可加入500μl 异丙醇，产量高于加结合液,但A260/A280略有降低，不影响下游实验)，颠倒混匀2min，时文静置1min。将EP 管置于磁力架上进行磁分离，吸弃废液（注意吸净管盖及管底残液）。

3.洗涤

⑴ 加入600μl 70% 乙醇，吸打或点振5～10 次，然后磁分离，注意吸净管盖及管底的残液；

⑵ 重复步骤⑴一次，室温下开盖干燥10-20min或恒温箱（不高于55℃）内开盖干燥5min，注意防止污染。

4.洗脱

加入100μl 洗脱液，缓慢抽吸混匀，65℃温浴10min。每隔2～3min 轻摇EP管几下混匀。然后磁分离，小心吸取上清液至新的EP管中，即可进行下游实验。

常见问题及参考意见

得率低

（1）样品没有研磨充分，请尽量将样品研磨充分；

（2）组织没有完全裂解完，裂解时间不够或没有离心直接进行下一步操作；

可适当延长裂解时间，最长不超过60min。样品裂解后，请一定要离心后再进行下一步操作；

（3）结合不充分；

结合过程中要使磁珠一直处于悬浮状态，并且充分颠倒混匀；

（4）取样量大于说明书给出量；

取样量请严格按照说明书操作。

条带弥散

（1）样品不新鲜或反复冻融多次：尽量用新鲜样品进行试验，如果样品需要保存，可根据试验，分装保存样品，尽量避免反复冻融；

（2）研磨时间太长，造成核酸降解：请研磨尽量迅速，防止DNA 降解；

（3）环境温度太高：可以将研钵置于-20℃预冷或置于液氮保存后再进行研磨，如果所提取材料基因组极易降解，可用液氮研磨；

（4）裂解时间太长：裂解时间不要超过60min；

（5）提取后模板DNA 放置时间太长：提取后如有需要，请尽量及时进行电泳试验。短期内可置于4℃保存，长期请置于-20℃保存（尽量注意避免反复冻融）。

DNA液有颜色

（1）洗涤过程不充分：如果结合后磁珠呈团状、丝状或颗粒状，要增加点震力度及次数，充分吹打混匀。

（2）裂解不充分：将组织充分研磨、适当增加裂解液S1和S2用量，也可以延长裂解时间。

（3）样品用量大于说明书给出量而其他试剂用量没有相应调整：严格按照说明书操作，如果需要增大样本量，可以等比例增大裂解液S1、S2、蛋白酶 K以及磁珠用量，其他试剂用量可不改变。

DNA样品不纯，干扰后续实验

（1）DNA液有乙醇残留：洗涤时，请注意吸净管盖及管底的残液。此外，磁珠应完全干燥，保证无乙醇残留。

（2）磁珠洗涤不充分：加入70% 乙醇时，请吸打或点振混匀。如有必要，可增加一次洗涤步骤。

（3）DNA液中吸入磁珠：如果不小心吸入磁珠，请将上清液返回原管，待磁珠完全吸附至管壁后重新吸取上清。或者将吸取的上清液10，000rpm离心2min，再取上清。

（4）DNA液中含有蛋白质等杂质：建议适当减少样品用量。

（5）DNA液中含有轻微盐离子等杂质，此为TE保存液正常现象，不影响下游实验。如有特殊需要，可使用等量的经高压灭菌的去离子水作为洗脱液。为方便实验，可将获得的DNA液置于-20℃环境分装保存。