质粒提取磁珠试剂盒
本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，从样品中分离纯化高质量质粒DNA，特殊包被的磁珠，在一定条件下对目的DNA具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的DNA，能够达到快速分离纯化DNA 的目的。整个过程不涉及有毒试剂，安全、便捷、提取的DNA 纯度高。使用本试剂盒纯化的基因组DNA (OD260-OD320)/(OD280-OD320)均在1.7～2.0之间，可以应用到各类下游分子生物学实验。
|
货号
|
名称
|
规格
|
|
MB-60902-100
|
磁珠法快速质粒DNA提取试剂盒
|
100T
|
适用范围
适用于各种质粒DNA 的提取，适用于自动化核酸提取平台。
试剂盒包装及组成
|
试剂盒组成
|
数量
|
|
裂解液S1
|
50ml
|
|
裂解液S2
|
20ml
|
|
结合液
|
50ml
|
|
磁珠
|
1.5ml*2
|
|
洗脱液
|
20ml
|
|
使用说明书
|
1份
|
注意事项
1. 菌种过夜培养OD 值需达到0.1 以上。
2. 磁珠用前一定要充分混匀。
3. 取过夜培养的菌液离心后，尽量吸干净上清，否则可能影响质粒纯度。
4. 整个裂解过程操作尽量温和，并在要求时间内完成。
5. 如果菌液浓度较高，则建议磁珠量可适当增加，以获取高浓度质粒。
操作方法
1.裂解
取1-2ml（低拷贝质粒可取2-5ml）过夜培养的菌液至1.5mlEP 管中，12,000rpm 离心1min，尽量吸净上清，加入100μl Buffer A（高拷贝可用50ul），振荡重悬菌体，保证无菌块存在。加入100μl Buffer B 温和颠倒混匀6～9 次，至溶液清澈可见，时间3min。加入75μl Buffer C 立即温和颠倒混匀6～9 次，溶液出现絮状沉淀，静置冰上2min 以充分中和。12,000rpm 离心10min。
2.结合
取上清于新的1.5mlEP 管中,加入振荡混匀的磁珠5μl，异丙醇250μl（自备），颠倒混匀5min。将EP 管置于磁力架上进行磁分离，吸弃废液（吸净管盖及管底残液）。
3.洗涤
加入500μl 洗涤液，轻柔混匀1-2min，然后磁分离，吸净管盖及管底的残液；
4.洗脱
室温晾干5min，加入100μl 洗脱液，缓慢抽吸混匀，65℃温浴10min。每隔2～3min 轻摇EP 管几下混匀。然后磁分离，小心吸取上清液至新的EP 管中，进行下游实验。
常见问题及参考意见
|
常见问题
|
可能的原因
|
建议
|
|
得率低
|
大肠杆菌老化
|
涂布平板培养后，重新挑选新菌落进行液体培养
|
|
未加抗生素或抗生素失效导致质粒丢失
|
确保培养基含有正确、有效的抗生素
|
|
菌体浓度太低
|
增加培养前菌体接入量或增加菌体收集（取2～5 ml 菌体离心），或检查抗生素浓度是否过高
|
|
培养菌体没在对数生长期早期
|
保存时间较长的菌种,需过夜培养2～3 次后使用
|
|
质粒拷贝数低
|
由于使用低拷贝数载体引起的质粒DNA 提取量低，可更换具有相同功能的高拷贝数载体
|
|
裂解不充分
|
使用过多菌体培养液，会导致菌体裂解不充分，可减少菌体用量或增加试剂的用量
|
|
溶液使用不当
|
BufferB和BufferC在温度较低时可能出现浑浊，应置于37℃保温片刻直至溶解为清亮的溶液，才能使用
|
|
裂解时间过长
|
加入BufferB后裂解时间不超过5分钟
|
|
结合不充分
|
结合过程中要使磁珠一直处于悬浮状态，结合时间严格按照说明书
|
|
洗脱液减少
|
根据需要可适当减少洗脱液用量（≥30μl）增加质粒产量
|
|
